NGS लाइब्रेरी तैयारी को स्वचालित कैसे करें: मैनुअल प्रोटोकॉल से सत्यापित वर्कफ़्लो तक

NGS लाइब्रेरी तैयारी DNA या RNA को ऐसी लाइब्रेरी में बदलती है जो सीक्वेंसिंग प्लेटफ़ॉर्म के अनुकूल हो। परीक्षण के अनुसार इसमें विखंडन या आकार चयन, द्वि-सूत्री DNA में रूपांतरण, अडैप्टर जोड़ना, प्रवर्धन, क्लीनअप और अंतिम मात्रा निर्धारण शामिल हो सकते हैं। लाइब्रेरी की गुणवत्ता जटिलता, पक्षपात, बैच प्रभाव और प्राप्त सीक्वेंस डेटा की उपयोगिता को प्रभावित कर सकती है (Head et al., 2014)।

स्वचालन दोहराव वाले द्रव-प्रबंधन को मानकीकृत कर सकता है और प्रत्यक्ष मानवीय श्रम घटा सकता है, लेकिन केवल रोबोट द्वारा किसी प्रोटोकॉल को चला सकना उसे वैध नहीं बनाता। रसायन, उपकरण विन्यास, लैबवेयर, सॉफ़्टवेयर विधि, नमूना प्रकार और लक्षित उपयोग मिलकर एक कार्यान्वयन बनाते हैं, जिसका समग्र मूल्यांकन आवश्यक है। इसलिए NGS स्वचालन की समीक्षाएँ बहु-चरणीय बाधा घटाने के अवसर के साथ-साथ थ्रूपुट, लचीलेपन, गुणवत्ता-नियंत्रण तक पहुँच, स्टाफ़ और लागत के अनुरूप रणनीति चुनने की आवश्यकता पर बल देती हैं (Hess et al., 2020; Socea et al., 2023)।

दायरा। यह लेख कार्यान्वयन और सत्यापन की मार्गदर्शिका है, किसी विशिष्ट किट की मानक संचालन प्रक्रिया नहीं। अपनी सटीक लाइब्रेरी-तैयारी किट और उपकरण के वर्तमान निर्देशों का पालन करें। नैदानिक या डायग्नोस्टिक उपयोग के लिए आपके प्रयोगशाला पर लागू नियमों के तहत सत्यापन भी आवश्यक है।

पाँच-भाग वाला रूपांतरण

1. लक्षित उपयोग और स्वचालन की सीमा निर्धारित करें।
2. मौजूदा मैनुअल विधि को स्पष्ट मशीन निर्देशों में बदलें।
3. चुने गए डेक पर द्रव-प्रबंधन और चुंबकीय-बीड प्रक्रियाएँ विकसित करें।
4. स्वचालित विधि की स्वीकृत मैनुअल विधि से तुलना करें और परिशुद्धता जाँचें।
5. विधि को केवल दस्तावेजीकृत स्वीकृति मानदंड, नियंत्रण, रखरखाव और परिवर्तन नियंत्रण के साथ जारी करें।

इन चरणों की सफलता सुनिश्चित करने वाला कोई सार्वभौमिक न्यूनतम बैच आकार, निश्चित सत्यापन अवधि या अतिरिक्त अभिक्रियाओं की डिफ़ॉल्ट संख्या नहीं है। ये मान परीक्षण, जोखिम, उपकरण, लागत मॉडल और प्रयोगशाला की आवश्यकताओं पर निर्भर करते हैं (Socea et al., 2023)।

1. निर्धारित करें कि उपकरण क्या करेगा—और क्या नहीं करेगा

सटीक किट संस्करण, नमूना प्रकार, इनपुट सीमा, वांछित बैच आकार, सीक्वेंसिंग प्लेटफ़ॉर्म और वर्कफ़्लो द्वारा समर्थित किए जाने वाले परिणाम से शुरू करें। फिर तय करें कि कौन-सी प्रक्रियाएँ लिक्विड हैंडलर पर रहेंगी और किनके लिए ऑफ़-डेक उपकरण या मानव स्थानांतरण चाहिए। NGS स्वचालन की कोई एक वास्तुकला नहीं है: वर्कस्टेशन पाइपेटिंग हेड, मैग्नेट, ग्रिपर, शेकर, तापमान नियंत्रण, थर्मोसाइक्लर, रीडर, डेक क्षमता और सॉफ़्टवेयर लचीलेपन में भिन्न होते हैं (Hess et al., 2020; Socea et al., 2023)।

PCR या QC को स्वभावतः “मैनुअल” न कहें। कुछ प्रणालियों पर वे स्वचालित और अन्य पर ऑफ़-डेक होते हैं। इसी तरह वैकल्पिक मॉड्यूल वाले उपकरण को उस कार्ययुक्त तब तक न बताएं, जब तक मॉड्यूल वास्तव में स्थापित और योग्य न हो।

2. मैनुअल प्रोटोकॉल को मशीन-पठनीय विधि में बदलें

मैनुअल प्रोटोकॉल अक्सर “अच्छी तरह मिलाएँ”, “साफ़ होने तक प्रतीक्षा करें” या “पेलेट को न छेड़ें” जैसे वाक्यों में निर्णय छिपाता है। मशीन विधि को इन निर्णयों की जगह स्पष्ट, परीक्षण-योग्य पैरामीटर देने होंगे। हर चरण के लिए कम से कम यह दर्ज करें:

• अभिकर्मक का नाम, लॉट-संवेदी आवश्यकताएँ, भंडारण स्थिति और कार्य आयतन;
• स्रोत और गंतव्य लैबवेयर, वेल ज्यामिति और प्लेट अभिविन्यास;
• एस्पिरेशन और डिस्पेंस आयतन, ऊँचाई, गति, विलंब और जहाँ लागू हो टिप प्री-वेटिंग;
• मिश्रण आयतन, गति, चक्र संख्या और क्या प्लेट प्रतीक्षा के दौरान बीड बैठ सकते हैं;
• इनक्यूबेशन सेटपॉइंट, सत्यापित नमूना तापमान, अवधि, ढक्कन या सील और स्थानांतरण समय;
• मैग्नेट प्रकार, प्लेट संगतता, पृथक्करण अंतिम बिंदु, पेलेट स्थान और एस्पिरेशन पथ;
• टिप नीति, प्री-PCR और पोस्ट-PCR अलगाव तथा संदूषण नियंत्रण;
• हर मानवीय हस्तक्षेप, सुरक्षित विराम बिंदु, रिकवरी क्रिया और ऑडिट-लॉग फ़ील्ड।

निर्माता के निर्देश आरंभिक बाध्यता हैं, बाद में जोड़ा जाने वाला विवरण नहीं। उदाहरण के लिए वर्तमान Illumina DNA Prep दस्तावेज़ उपयोगकर्ताओं को शुद्धिकरण बीड कमरे के तापमान पर लाने, पुनर्निलंबन के लिए वॉर्टेक्स करने, गाढ़े निलंबन को धीरे एस्पिरेट और डिस्पेंस करने, मैग्नेट पर द्रव साफ़ होने तक प्रतीक्षा करने, शेष इथेनॉल हटाने और परिभाषित सुखाने तथा पुनर्निलंबन चरण अपनाने का निर्देश देते हैं (Illumina DNA Prep, document 1000000025416 v12)। स्वचालित विधि को इन क्रियाओं का उद्देश्य पूरा करना चाहिए, यह मानकर नहीं चलना चाहिए कि मैनुअल हावभाव सीधे रोबोट पर लागू हो जाएगा।

प्रचलित नियम की नकल के बजाय अतिरिक्त मात्रा मापें

अभिकर्मक की अतिरिक्त मात्रा को चुने गए रिज़र्वॉयर का एस्पिरेट करने योग्य अवशिष्ट आयतन, पाइपेटिंग व्यवहार और वास्तविक वर्कफ़्लो की हानि समेटनी चाहिए। इसे अतिरिक्त अभिक्रियाओं की किसी सार्वभौमिक निश्चित संख्या से सुरक्षित रूप से परिभाषित नहीं किया जा सकता। Meijers और सहकर्मियों ने अपनी विशिष्ट आठ-नमूना स्वचालित विधि में चार नमूनों के बराबर अतिरिक्त अभिकर्मक इस्तेमाल किया, जबकि Illumina DNA Prep मैनुअल अपने क्लीनअप चरण के लिए इथेनॉल तैयार करते समय 20% अतिरिक्त मात्रा निर्दिष्ट करता है। दोनों कार्यान्वयन-विशिष्ट उदाहरण हैं, सामान्य डिफ़ॉल्ट नहीं (Meijers et al., 2024; Illumina DNA Prep v12)।

3. चुंबकीय-बीड प्रक्रियाओं को नियंत्रित प्रक्रिया मानें

सॉलिड-फ़ेज़ रिवर्सिबल इमोबिलाइज़ेशन (SPRI) का मूल वर्णन पॉलीएथिलीन ग्लाइकॉल और लवण की उपस्थिति में कार्बोक्सिलेटेड चुंबकीय कणों से DNA के प्रतिवर्ती बंधन के रूप में किया गया था, जिसमें स्वचालन के अनुकूल 96-वेल PCR-उत्पाद शुद्धिकरण विधि इस्तेमाल हुई (DeAngelis et al., 1995)। वह आधारभूत शोध आधुनिक NGS किटों के लिए कोई सार्वभौमिक बीड अनुपात, फ़्रैगमेंट-आकार कटऑफ़, सुखाने का समय या अडैप्टर-डाइमर हटाने का नियम स्थापित नहीं करता।

उपयोग में आने वाली सटीक किट के लिए विकसित और सत्यापित करें:

• डिस्पेंसिंग से पहले और उसके दौरान बीडों को एकसमान निलंबन में कैसे लौटाया जाता है;
• विधि द्वारा निर्दिष्ट बीड-से-नमूना अनुपात और जोड़ने का क्रम;
• ऐसा मिश्रण जो अत्यधिक झाग या एरोसोल बनाए बिना रिकवरी दे;
• पृथक्करण समय और सुपरनेटेंट साफ़ होने का निर्णय लेने का मानदंड;
• वह एस्पिरेशन ऊँचाई और पथ जो पेलेट उठाए बिना सुपरनेटेंट हटाए;
• बीड को अधिक सुखाए बिना शेष वॉश घोल का पूरा निष्कासन;
• अगले स्थानांतरण से पहले पूर्ण एल्यूशन और पुनर्निलंबन।

ये चर परस्पर प्रभाव डालते हैं। उदाहरण के लिए कम लाइब्रेरी यील्ड इनपुट गुणवत्ता, एंज़ाइम प्रदर्शन, स्थानांतरण हानि, शेष इथेनॉल, अधिक सुखाने या अपूर्ण एल्यूशन को दर्शा सकती है, न कि किसी एक सार्वभौमिक “बीड समस्या” को। Illumina विशेष रूप से चेतावनी देता है कि शेष इथेनॉल परीक्षण प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता है और वॉश चरणों के दौरान बीड पेलेट को अधिक सुखाना या छेड़ना नहीं चाहिए (Illumina DNA Prep v12)।

अडैप्टर डाइमर के भी कई संभावित कारण हैं। उनमें लक्षित इंसर्ट के बिना पूर्ण अडैप्टर अनुक्रम होते हैं और वे फ़्लो सेल पर क्लस्टर बनाकर सीक्वेंसिंग रीड का उपभोग कर सकते हैं। Illumina कम या खराब-गुणवत्ता इनपुट और अक्षम बीड क्लीनअप को कारणों में गिनता है तथा लगभग 120–170 bp की अप्रत्याशित पीक को सामान्य संकेत बताता है; सुधारात्मक कदम फिर भी सटीक लाइब्रेरी किट और सीक्वेंसिंग प्लेटफ़ॉर्म के अनुसार होना चाहिए (Illumina Knowledge Article #1911)।

4. तुलना चलाने से पहले सत्यापन डिज़ाइन करें

स्वचालित परिणाम देखने से पहले स्वीकृति मानदंड तय करें। अध्ययन डिज़ाइन को लक्षित नमूना प्रकार और परिणाम दर्शाने चाहिए, न कि इंटरनेट की स्थिर चेकलिस्ट। Socea और सहकर्मी शुद्धता, पुनरावृत्तता, पुनरुत्पादकता, विश्लेषणात्मक संवेदनशीलता और विशिष्टता, विधि तुलना तथा रिपोर्ट योग्य अंतिम बिंदु में अंतर करते हैं; वे यह भी कहते हैं कि परिशुद्धता के नमूना संख्या प्रत्येक प्रयोगशाला के सत्यापन ढाँचे में निर्धारित और अनुमोदित होनी चाहिए (Socea et al., 2023)।

एक बचाव-योग्य तुलना में सामान्यतः शामिल हैं:

1. विधि तुलना। स्वीकृत मैनुअल और प्रत्याशी स्वचालित विधियों से मिलान की गई सामग्री तैयार करें। जहाँ संभव हो इनपुट सामग्री, अभिकर्मक लॉट और डाउनस्ट्रीम सीक्वेंसिंग स्थितियों को समान रखें।
2. पुनरावृत्तता। समान स्थितियों में भिन्नता मापने के लिए एक रन में नमूने दोहराएँ।
3. पुनरुत्पादकता। प्रासंगिक दिनों, ऑपरेटरों, उपकरणों, अभिकर्मक लॉटों या रनों में दोहराएँ।
4. सीमा और चुनौती नमूने। इनपुट सीमा, नमूना मैट्रिक्स, गुणवत्ता अवस्थाएँ और लक्षित उपयोग द्वारा वास्तव में अनुमत कठिन परिस्थितियाँ शामिल करें।
5. संदूषण नियंत्रण। नेगेटिव नियंत्रण और सूचनाप्रद पॉज़िटिव इस तरह रखें कि कैरीओवर और नमूना अदला-बदली पकड़ी जा सके।
6. विफलता प्रबंधन। रुकावटें, अनुपलब्ध मॉड्यूल, अपर्याप्त आयतन, विफल QC और अनुमोदित रिकवरी या सुरक्षित-विराम प्रक्रिया जाँचें।

लाइब्रेरी को अंतिम परिणाम से जोड़ने वाले मेट्रिक्स चुनें

कोई एक मेट्रिक समतुल्यता सिद्ध नहीं करता। लाइब्रेरी सांद्रता स्वीकार्य दिख सकती है, जबकि फ़्रैगमेंट वितरण, संदूषण, कवरेज या परीक्षण-विशिष्ट अंतिम बिंदु विफल हो। Head और सहकर्मी बताते हैं कि लाइब्रेरी निर्माण कैसे पक्षपात, कम जटिलता और बैच प्रभाव उत्पन्न कर सकता है; Socea और सहकर्मी दिखाते हैं कि लक्षित परीक्षण के लिए QC चेकपॉइंट और परिणाम-विशिष्ट मानदंड क्यों चुने जाने चाहिए (Head et al., 2014; Socea et al., 2023)।

प्रकाशित तुलनाएँ क्या दिखाती हैं—और क्या नहीं

प्रकाशित अध्ययन डिज़ाइन के उपयोगी उदाहरण हैं। वे अलग किट, उपकरण, नमूना प्रकार या परिणाम के सत्यापन का विकल्प नहीं हैं।

बैक्टीरियल होल-जीनोम सीक्वेंसिंग: flowbot ONE पर Illumina DNA Prep

Meijers और सहकर्मियों ने 16 बैक्टीरियल DNA एक्सट्रैक्ट मैनुअल और स्वचालित Illumina DNA Prep वर्कफ़्लो से तैयार किए। उनमें से आठ एक्सट्रैक्ट एक स्वतंत्र स्वचालित रन में फिर संसाधित हुए। स्वचालित विधि ने पाइपेटिंग, हीटिंग/कूलिंग और चुंबकीय हार्डवेयर सहित एक विशिष्ट flowbot ONE डेक इस्तेमाल किया; PCR ट्यूब स्ट्रिप ऑफ़-डेक थर्मोसाइक्लर में स्थानांतरित किए गए और इंडेक्स मैनुअल रूप से जोड़े गए (Meijers et al., 2024)।

अध्ययन ने मैनुअल और स्वचालित विधियों के बीच लाइब्रेरी DNA सांद्रता में माध्यिका 1.5-गुना अंतर बताया, पर मान समान नहीं थे: एक Klebsiella pneumoniae लाइब्रेरी मैनुअल रूप से 10.9 ng/µL और स्वचालन के बाद 1.9 ng/µL मापी गई। सीक्वेंसिंग और प्रत्येक लाइब्रेरी को दस लाख रीड पर सामान्यीकृत करने के बाद असेंबली मेट्रिक्स समान थे। जिन 14 स्ट्रेन के लिए प्रजाति-विशिष्ट cgMLST स्कीम उपलब्ध थी, उनके कॉम्प्लेक्स प्रकार 100% सहमत थे; शेष दो स्ट्रेन के लिए लागू स्कीम नहीं थी (Meijers et al., 2024)।

उस विन्यास में आठ के बैच के लिए प्रत्यक्ष कार्य समय स्वचालित वर्कफ़्लो में 25 मिनट और मैनुअल वर्कफ़्लो में 125 मिनट था। टर्नअराउंड समय क्रमशः 170 और 200 मिनट था। यह उस अध्ययन सेटअप में प्रत्यक्ष कार्य समय में 80% लेकिन कुल टर्नअराउंड समय में 15% कमी है—NGS लाइब्रेरी तैयारी में सार्वभौमिक पाँच-गुना तेजी नहीं (Meijers et al., 2024)।

mRNA-seq: Biomek i7 पर NEBNext Ultra II Directional RNA

Santacruz और सहकर्मियों ने दो मानव कोशिका लाइनों से प्राप्त 84 RNA नमूनों की मैनुअल और स्वचालित लाइब्रेरी की तुलना NEBNext Ultra II Directional RNA किट और Biomek i7 से की। उन्होंने निकट सहसंबद्ध अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल बताई। स्वचालित विधि ने दो-दिवसीय, लगभग 12-घंटे के मैनुअल प्रोटोकॉल को लगभग दो घंटे की अभिकर्मक तैयारी के बाद नौ घंटे के हैंड्स-फ़्री उपकरण रन से बदला। ये परिणाम अध्ययन के 250 ng RNA इनपुट, सेल-लाइन नमूने, किट और वर्कस्टेशन पर लागू होते हैं; वे क्षतिग्रस्त, कम-इनपुट, नैदानिक या अन्य RNA नमूनों का प्रदर्शन स्थापित नहीं करते (Santacruz et al., 2022; 2024 corrigendum)।

एक अनुमानित कारण नहीं, प्रेक्षणों से समस्या खोजें

एक से अधिक कारक एक ही लक्षण पैदा कर सकते हैं। एक बार में एक उचित पैरामीटर बदलें, विफल रन का साक्ष्य सुरक्षित रखें और “स्वचालन काम नहीं करता” घोषित करने के बजाय संबंधित तुलना दोहराएँ। आरंभिक रिलीज़ के बाद भी नियमित कैलिब्रेशन, रखरखाव, स्टाफ़ दक्षता, QC निगरानी और स्क्रिप्ट बदलाव की नियंत्रित प्रक्रिया आवश्यक हैं (Socea et al., 2023)।

उपकरण लिंक: केवल डेक आकार नहीं, विधि का मूल्यांकन करें

Pize NGS लाइब्रेरी-तैयारी एप्लिकेशन पेज तीन संबंधित स्वचालित नमूना-तैयारी प्रणालियाँ सूचीबद्ध करता है। नीचे के विवरण वर्तमान Pize कैटलॉग का सार हैं; वे स्वतंत्र सत्यापन डेटा नहीं और किसी विशेष किट की संगतता स्थापित नहीं करते।

“30 स्थिति” को “30 नमूने” न समझें, वैकल्पिक मॉड्यूल को मानक न मानें और iLab-300R के 384-नमूना बीड-शुद्धिकरण कथन को 384-नमूना NGS लाइब्रेरी तैयारी के दावे में न बदलें। सटीक स्क्रिप्ट संस्करण, डेक मानचित्र, लैबवेयर सूची, सत्यापित इनपुट सीमा, QC डेटा, शेष मैनुअल चरण, सहायता व्यवस्था और परिवर्तन-नियंत्रण प्रक्रिया माँगें। विस्तृत AMTK कैटलॉग पेज ब्राउज़िंग में उपयोगी है, पर कैटलॉग सूची साझेदारी, नियामकीय स्थिति या किसी प्रयोगशाला के लिए उपयुक्तता सिद्ध नहीं करती।

सीक्वेंसिंग के बाद: वेट-लैब और विश्लेषण सत्यापन अलग रखें

Pize वैज्ञानिक कंप्यूटिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए AI कोडिंग सहायक है। यह Pize Code और Positron में चलता है तथा SDK के रूप में भी उपलब्ध है। यह सॉफ़्टवेयर भूमिका लिक्विड-हैंडलर विधि से अलग है: Pize को ऊपर सूचीबद्ध उपकरणों को नियंत्रित, योग्य या एकीकृत करने वाला नहीं बताया जाना चाहिए। किसी भी डाउनस्ट्रीम विश्लेषण वर्कफ़्लो को उसके अपने लक्षित उपयोग के लिए दस्तावेजीकृत और सत्यापित करना होगा, ठीक वेट-लैब वर्कफ़्लो की तरह।

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

कितने नमूनों पर स्वचालन सार्थक होता है?

कोई सार्वभौमिक सीमा नहीं है। वर्तमान प्रत्यक्ष कार्य समय, बैच आवृत्ति, पुनरावृत्ति दर, स्टाफ़ बाधाएँ, अभिकर्मक और डिस्पोज़ेबल उपयोग, रखरखाव, उपकरण उपयोग और सत्यापन प्रयास की तुलना करें। कम-मात्रा प्रयोगशाला तेज़ छोटे बैच को महत्व दे सकती है; उच्च-मात्रा प्रयोगशाला क्षमता को प्राथमिकता दे सकती है। उचित संतुलन वर्कफ़्लो पर निर्भर है (Socea et al., 2023)।

क्या Illumina या NEB किट को सीधे स्वचालित किया जा सकता है?

केवल तब, जब सटीक किट और संस्करण, उपकरण विन्यास, लैबवेयर और मॉड्यूल के लिए विधि हो—या प्रयोगशाला ऐसी विधि विकसित और सत्यापित करे। एक रोबोट पर काम करने वाला प्रोटोकॉल उस कार्यान्वयन का साक्ष्य है, दूसरे प्लेटफ़ॉर्म के लिए हस्तांतरणीय गारंटी नहीं (Hess et al., 2020)।

सत्यापन में कितना समय लगना चाहिए?

हर प्रयोगशाला पर लागू कोई वैज्ञानिक रूप से उचित निश्चित अवधि नहीं है। समय लक्षित उपयोग, नियामकीय भार, नमूना विविधता, स्वीकृति मानदंड, युग्मित सामग्री की उपलब्धता, परिशुद्धता स्थितियों की संख्या, विफलता जाँच और अध्ययन के दौरान विधि या हार्डवेयर बदलने पर निर्भर है (Socea et al., 2023)।

क्या स्वचालित और मैनुअल लाइब्रेरी का यील्ड समान होना चाहिए?

ज़रूरी नहीं। प्रश्न यह है कि पूर्वनिर्धारित अंतर लाइब्रेरी QC, सीक्वेंसिंग QC और परीक्षण-विशिष्ट अंतिम बिंदु पर स्वीकार्य हैं या नहीं। Meijers अध्ययन ने सामान्यतः तुलनीय परिणाम के साथ एक स्पष्ट सांद्रता अपवाद भी बताया, इसलिए अंतिम-बिंदु तुलना समान यील्ड के दावे से अधिक सूचनाप्रद है (Meijers et al., 2024)।

क्या “वॉक-अवे” का अर्थ कोई मानवीय कार्य नहीं है?

नहीं। सेटअप, अभिकर्मक तैयारी, लोडिंग, ऑफ़-डेक स्थानांतरण, QC, रिकवरी और समीक्षा मैनुअल रह सकते हैं। ऊपर के दोनों अध्ययनों में flowbot ONE विधि को ऑफ़-डेक PCR प्रबंधन और मैनुअल इंडेक्स जोड़ना पड़ा, जबकि Biomek i7 विधि को नौ-घंटे के उपकरण रन से पहले लगभग दो घंटे की अभिकर्मक तैयारी चाहिए थी (Meijers et al., 2024; Santacruz et al., 2022)।

संदर्भ

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चित्र 1 और 2 Meijers et al., Scientific Reports 14, 8159 (2024) से Creative Commons Attribution 4.0 International License (CC BY 4.0) के अंतर्गत पुनरुत्पादित हैं। प्रदर्शन स्केलिंग के अतिरिक्त चित्र अपरिवर्तित हैं। उनका समावेश लेखकों, Flow Robotics, Illumina, Springer Nature या किसी अन्य उल्लिखित संगठन के समर्थन का संकेत नहीं है।