Microscopía avanzada
Microscopía Raman (CARS y SRS)
CARS y SRS se usan para imagen vibracional rápida, sensible y sin marcadores.
Presentación del producto
Qué aportan CARS y SRS
La imagen vibracional aporta especificidad química, útil en microscopía biológica y en las ciencias farmacéutica y de materiales, en especial allí donde otras técnicas de microscopía dan resultados ambiguos y no pueden usarse marcadores. La microscopía de dispersión Raman espontánea, aunque sensible, es lenta. Sin embargo, sus homólogas no lineales – la dispersión Raman anti-Stokes coherente (CARS) y la dispersión Raman estimulada (SRS) – pueden usarse para imagen vibracional rápida, de alta sensibilidad y sin marcadores.
En qué se diferencian CARS y SRS
En la microscopía CARS, se usan dos haces para producir radiación a una tercera longitud de onda a través de un nivel vibracional de la muestra. La diferencia de energía entre los dos haces puede sintonizarse a distintos niveles vibracionales, lo que proporciona contraste de imagen química. La señal CARS producida se sitúa en una longitud de onda distinta, por lo general libre de fondo, lo que hace que su detección sea relativamente sencilla. Sin embargo, CARS distorsiona las formas de línea vibracionales y posee un componente de señal no resonante, lo que complica la atribución química. SRS está libre de estas desventajas; no obstante, su señal es una pequeña modulación sobre uno de los haces incidentes y requiere un esquema de detección elaborado.
CRONUS-2P para Raman de dos haces
CRONUS-2P es un láser de femtosegundo que proporciona tres salidas simultáneas y sincronizadas, con alta tasa de repetición, alta potencia de salida, corta duración de pulso y control de GDD. Dos salidas son sintonizables de forma independiente en los intervalos 680–960 nm y 940–1300 nm, mientras que la tercera está fija en 1025 nm. Las tres salidas simultáneas permiten aplicaciones CARS y SRS avanzadas, con imagen de doble banda, una selección más amplia de frecuencias de resonancia vibracional, sintonización de dos haces a diferencia constante y realce resonante.
SRS de materiales poliméricos
(a) Espectros Raman espontáneos y SRS de materiales poliméricos, normalizados con el pico máximo de la molécula de interés. (b) Imágenes SRS de perlas de PS teñidas y sin teñir. Las imágenes se registraron mediante CRONUS-2P.
SRS de células y de β-carotene
(a) Imagen de núcleos de células HeLa fijadas y teñidas con AZ568, mediante SRS (rojo) y fluorescencia (verde). (b) Espectro SRS y Raman espontáneo (a 488 nm) de una solución 1 mM de AZ568 en DMSO-d6. (c) Estructura de β-carotene. (d) Espectro de β-Carotene registrado con SRS y Raman espontáneo. (e) Espectro de focalización espectral de una solución de β-carotene en DMSO-d6. Las imágenes se registraron mediante CRONUS-2P.
